DLD-1(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞)
細(xì)胞名稱(chēng)：DLD-1 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
組織來(lái)源：結(jié)直腸腺癌
培養(yǎng)條件：RPMI-1640 +10% FBS
形 態(tài)：貼壁；上皮細(xì)胞樣
背 景：DLD-1是1977-1979年間D.L. Dexter和同事分離的兩株結(jié)直腸腺癌細(xì)胞株中的一株。細(xì)胞的CSAp陰性(CSAp-)。DLD-1細(xì)胞的p53 抗原表達(dá)呈陽(yáng)性(p53抗原產(chǎn)生了一個(gè)C→T點(diǎn)突變導(dǎo)致241位的Ser→Phe)。角蛋白**過(guò)氧化物酶染色陽(yáng)性。癌基因c-myc, K-ras, H-ras, N-ras, myb, sis 和fos的表達(dá)呈陽(yáng)性。癌基因N-myc的表達(dá)未做檢測(cè)。表達(dá)腫瘤特異性核基質(zhì)蛋白CC-2,CC-3,CC-4,CC-5和CC-6。
DLD-1(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞)操作說(shuō)明：
1)對(duì)于常溫運(yùn)輸?shù)募?xì)胞，收到細(xì)胞后，檢查是否有運(yùn)輸問(wèn)題，即細(xì)胞培養(yǎng)瓶或管是否破損，細(xì)胞培養(yǎng)液是否溢出。若沒(méi)有運(yùn)輸問(wèn)題，請(qǐng)75%酒精**后，保留封口膜，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置。嚴(yán)格檢查培養(yǎng)箱的參數(shù)：溫度，濕度和CO2濃度。細(xì)胞靜置時(shí)間一般為6-12小時(shí)后，細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，即可開(kāi)始后續(xù)操作。選用正確的細(xì)胞培養(yǎng)體系，DLD-1(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)。條件允許，培養(yǎng)的前三天內(nèi)做細(xì)胞拍照記錄，通過(guò)郵件發(fā)送給我們做及時(shí)狀態(tài)跟蹤。
2)對(duì)于干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞，請(qǐng)取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。然后將其復(fù)蘇培養(yǎng)，次日更換培養(yǎng)液。
DLD-1(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞)注意事項(xiàng)：
1)細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。
2)對(duì)于生長(zhǎng)緩慢的貼壁細(xì)胞：可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度，或隔日換液的方法來(lái)保證細(xì)胞的狀態(tài)和生長(zhǎng)速度。
3)對(duì)于生長(zhǎng)不均的貼壁細(xì)胞：在培養(yǎng)過(guò)程中若出現(xiàn)細(xì)胞分布明顯不均時(shí)（即某一區(qū)域細(xì)胞已重疊生長(zhǎng)，而旁邊則為一塊空白），此時(shí)可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重新打散，貼壁，加入新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
DLD-1(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞)下面介紹幾種細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常見(jiàn)的污染：
一)桿菌污染：培養(yǎng)基中加入***可以減少此種污染，但也不是**的。
二)支原體污染：傳說(shuō)中的黑焦蟲(chóng)，長(zhǎng)得暴快。24小時(shí)就滿視野都是了。污染源大多數(shù)情況下是培養(yǎng)用血清。
三)***污染：似乎無(wú)處不在，而且頑固得很。長(zhǎng)得暴快(12h就能在細(xì)胞上面密布)。培養(yǎng)液澄清。低倍顯微鏡下像黑色的沙子鋪在細(xì)胞上，高倍鏡下呈樹(shù)枝狀或葡萄狀。
四)霉菌污染、比較常見(jiàn)的一種污染，常常來(lái)源于污染的空氣、水和器械。
